原创《不同年龄、不同剂量对杜泊羊胚胎移植的影响》
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摘 要：试验以杜泊羊为供体母羊、以蒙古羊为受体母羊,进行供受体羊同期发情、供体羊超数排卵、胚胎采集、胚胎移植.试验分两个部分,第一部分选择50头杜泊育成母羊,52只经产杜泊母羊分别注射适合的FSH剂量进行超数排卵,第二部分试验选60只育成杜泊母羊,分三组每组20只注射不同剂量的FSH进行超数排卵,结果表明,经产杜泊母羊的冲卵数和可用胚数显著高于育成杜泊母羊（p<0.05）.FSH剂量为175IU-195IU时冲卵数和可用胚数显著高于其他两组（p<0.05）.
关键词：胚胎移植；杜泊绵羊；超数排卵
1 前言
在畜牧业十分发达的国家,羊的胚胎移植技术从70年代就开始从实验室做实验得结论变成实际生活中的应用,羊的胚胎移植是近30年来在国际上研究进展十分迅速的一项技术.我国在20世纪70年代把胚胎移植运用在畜牧业上,并且绵羊胚胎移植技术在1974年取得突破性进展[1].
2 材料与方法
2.1 试验时间和地点
2015年11月1日至2015年11月23日；通辽市牧源农业科技有限公司.
2.2 试验材料
2.2.1 试验动物.供体母羊：162只杜泊羊,无遗传和传染性疾病；无异常表现,没有炎症、子宫内膜炎症、繁殖机能正常.受体羊为蒙古羊,营养状况优异,没繁殖障碍和传染性疾病.
2.2.2 试验药品、试剂与设备仪器.试验药品：促卵泡激素（FSH）100IU/支,郑州激素生产有限公司；氯前列烯醇0.2mg/支,郑州激素生产有限公司.孕激素海绵栓（牧源农业科技有限公司研发）、青霉素、链霉素、PBS磷酸缓冲液.试验仪器：玻璃器皿、创布、水浴锅、培养箱、注射器、带胶管的肠钳夹、钝形冲卵针、塑料吸管、酒精浴槽（国产）.
2.3 试验方法
2.3.1 试验分组.本试验是在通辽市牧源农业科技有限公司进行试验的.试验共选择了162头杜泊羊为供体母羊,其中包含110只育成母羊,52只经产母羊.实验分为两部分,第一部分是按供体羊的的不同年龄阶段进行超数排卵情况分为两组,具体分组情况为：育成供体母羊50只为第一组,经产供体母羊52只为第二组.第二部分是选择60只育成羊（体重55kg以上相近的情况下）做供体,每组20只,依据注射的FSH剂量范围上的不同分为三组：第一组注射FSH范围为135IU～155IU,第二组注射FSH范围为155IU～175IU,第三组注射FSH范围为175IU～195IU.
2.3.2 供、受体羊的同期发情处理.供体羊、受体羊的同期发情都采用诱导发情法[2].在杜泊羊发情季节末期,供、受体的发情日的第一天（记为0天）埋植栓,供体羊采用CIDR法一次性埋植13天,受体羊采用海绵栓法进行同期发情处理,埋植13天,第14天取出海绵栓,并在取出海绵栓的前一天注射戊雌酸二醇2～4mg.
2.3.3 供体羊超数排卵.本次超数排卵有两种方案.
方案一：根据供体羊的年龄阶段不同分为两组进行超数排卵.采用FSH剂量递减法处理：第一组是50头育成母羊,第二组是52头经产母羊.在自然发情或诱导发情的第12～13天开始肌肉注射FSH,早、晚各一次,间隔12h,分3天递减注射.第4次肌肉注射FSH的同时注射氯前列烯醇0.2mg.然后第一次配种时注射LH100IU.使用国产FSH总剂量为120IU-150IU,育成羊所用量为120IU,经产羊所用量为150IU.
方案二：根据给供体羊注射的FSH剂量不同分为三组,实验共用60只育成供体羊,每组20只,分别注射不同剂量的FSH.第一组135IU～155IU、第二组155IU～175IU、第三组175IU～195IU,注射方法与方案一一样.
2.4 数据处理与分析
使用SPSS17.0软件进行数据的整理与分析,采用单因素方差分析法.试验结果以平均值&plun;标准差,p<0.05差异显著.
3 结果
3.1 不同年龄阶段供体超数排卵结果
本实验的两个组（见表1）：第一组育成羊50只,第二组经产羊52只进行超数排卵.结果显示：第一组平均每只羊冲卵数为11.1枚（530/50）第二组平均每只羊冲卵数12.11枚（629/52）,第二组相对第一组冲卵数较高,二者差异显著（p<0.05）；第一组平均每只羊可用胚数6.46枚（323/50）,第二组平均每只羊可用胚数9.73枚（506/52）,第二组相对第一组可用胚数较高,二者差异显著（p<0.05）；第一组平均每只羊未受精卵数为3.6枚,第二组平均每只羊未受精卵数2.38枚,第一组平均每只羊未受精卵数高于第二组,二者差异显著（p<0.05）.FSH总剂量在一定范围内育成母羊比经产母羊的冲卵数、可用胚数都低,说明育成羊的生殖系统还没发育完全[3].
表1 不同年龄阶段超数排卵结果
3.2 不同FSH剂量的超排结果
本实验把60只育成供体羊分三组,分别注射不同剂量的FSH,结果如下（见表2）：第一组FSH剂量为135IU～155IU,平均冲卵数为7.35枚/只,第二组FSH剂量为155IU～175IU,平均冲卵数为8.18枚/只,第三组FSH剂量为175IU～195IU,冲卵数为10.12枚/只,第一组和第二组平均冲卵数差异不显著（p>0.05）；第一组平均冲卵数显著低于第三组（p<0.05）；第二组平均冲卵数显著低于第三（P<0.05）.第一组平均可用胚胎数为6.25枚/只,第二组平均可用胚胎数为7.48枚/只,第三组平均可用胚胎数为9.34枚/只,第一组和第二组平均可用胚数差异不显著（p>0.05）；第一组平均可用胚数显著低于第三组（p<0.05）；第二组的平均可用胚数显著低于第三组（p<0.05）.育成供体母羊在FSH剂量为175IU～195IU时冲卵数和可用胚数明显高于其他两组,表明175IU-195IU的FSH是育成杜泊羊的最佳超数排卵剂量.
表2 不同剂量范围FSH的超排结果
4 讨论
本试验共选102只杜泊羊做供体母羊,分两次试验；第一次选了52只育成杜泊母羊,50只经产杜泊母羊,注射FSH总剂量120IU进行超数排卵,结果显示平均每只育成母羊,可用胚数6.46枚.第二次试验选60只育成母羊分三组每组20只羊,注射FSH进行超数排卵.第一组平均每只羊的可用胚数为6.28枚；第二组平均每只羊的可用胚数为7.48枚；第三组平均每只羊可用胚数为9.34枚.50只经产母羊注射FSH总剂量150IU,平均每只羊的可用胚数为9.73枚.
参考文献
[1] 张乐.冬季绵羊胚胎移植应用的研究[D].东北农业大学,2008.
[2] 杜晨光.绵羊卵母细胞孤雌激素与体细胞核移植的研究[D].内蒙古大学,2005.
[3] 韩丽娟.肉用绵羊胚胎移植技术研究[D].东北农业大学,2007.
影响研究论文参考资料：
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