原创《淫羊藿苷和淫羊藿多糖对气管切开插管大鼠肺部炎症的影响》
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广西医科大学第一临床附属医院 广西壮族自治区南宁市 530021
【摘 要】目的：观察淫羊藿两种主要有效成分：淫羊藿苷（ICA）和淫羊藿多糖（EPS）对气管切开插管大鼠肺部炎症的不同作用.方法：将SPF 级健康雄性SD 大鼠随机分成正常组（A 组）、气管切开插管模型组（B 组）、淫羊藿苷用药组（C 组）、淫羊藿多糖用药组（D 组）,制作气管切开插管模型,造模成功6h 后,C 组开始给予淫羊藿苷灌胃,D 组给予淫羊藿多糖灌胃,A、B 两组以等量生理盐水,每日一次.分别在1d、3d、7d 三个时间段每组分别处死6 只大鼠,观察各组肺组织病理学变化,并用Simith 评分测定肺损伤情况；采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液中TNF-α 和IL-6 的浓度.结果：（1）光镜下B、C、D 三组大鼠肺组织病理三个时段均有不同程度的炎症等改变,Smith评分均高于A 组；但C、D 两组病变在三个时段均明显小于Ｂ组.Smith 评分显示C 组病变明显小于D 组.（2）支气管肺泡灌洗液中B、C、D 三组TNF-α、IL-6 含量变化趋势基本一致,在不同时间段均明显高于A 组,24h 时达到峰值,随后下降.两者在三组含量比较,B 组最高,其次D 组.结论：ICA 和EPS 均能起到抗炎作用,而ICA 明显优于EPS.
【关键词】气管切开插管留置；淫羊藿苷；淫羊藿多糖；炎症
临床上气管切开插管患者容易并发肺部感染,目前临床上多使用抗感染治疗,患者经常容易耐药或者治疗效果欠佳,且经济负担重.传统补益中药淫羊藿,具有补肾壮阳、祛风除湿等功效,在临床上经常用于治疗支气管哮喘和慢性支气管炎等肺部疾病[1,2].中药成分复杂, 一味药中不同有效组分或单体具有不同的作用.ICA和EPS 是淫羊藿的主要有效成分,因此,本实验通过动态观察肺组织病理学改变以及支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6 水平的变化,评估淫羊藿两种不同成分的抗炎作用.
1 材料和方法
1.1 实验动物及给药
SD 雄性大鼠, 体重150&plun;30g( 广西医科大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK( 桂)2014-0002）,随机分成A、 B、C、D 四组,A 组为正常对照组,B 组为气管切开插管留置模型非用药组, C 组为气管切开插管留置模型淫羊藿苷用药组,D 组为气管切开插管留置模型淫羊藿多糖用药组,每组18 只大鼠.饲养环境温度为25&plun;2℃,自由进水,普通饲料喂养.动物模型制作成功后6h 进行给药干预.根据人临床用药剂量估算实验动物用药[3], C 组给淫羊藿苷灌胃（60mg/kg）,D 组给淫羊藿多糖灌胃（12mg/kg）,A、B 组予等量生理盐水灌胃, 每日1 次.
1.2 实验药物
淫羊藿苷标准品（CAS 号：489-32-7, 货号：B21576）, HPLC ≥ 98%； 淫羊藿多糖( 批号：C22A6Y2480),纯度为50%,均购于上海源叶生物科技有限公司.
1.3 主要试剂
肿瘤坏死因子ELISA 试剂盒（TNF-α：CSB-E11987r）浓度及白介素-6ELISA 试剂盒（IL-6：CSB-E04640r）均购自于成都华美生物医药有限公司.
1.4 模型制备与取材
采用一次性硬膜外麻醉导管制作气管切开插管留置大鼠模型[4].在1d、3d、7d三个时段每组分别处死6 只大鼠.结扎右主支气管,用4℃预冷的灭菌生理盐水3ml反复灌洗肺部3 次,共回收肺泡灌洗液6ml, 4℃ 1500rpm 离心10 分钟,取上清分装于-80℃保存待检TNF-α 及IL-6；无菌分离右肺用4% 多聚甲醛固定液固定,行石蜡包埋、切片待行光镜观察肺组织变化.
1.5 观察指标与检测
1.5.1 肺组织病理学观察
取肺组织病理切片作苏木精- 伊红染色（HE 染色）,用显微镜观察制好的切片中肺组织的病理学改变,采用Smith 评分方法[5] 评估肺部病变程度.
1.5.2 TNF-α 及IL -6 浓度测定均采用双抗体夹心ELISA 法,按试剂盒说明进行检测.使用Curve Exert1.4 软件制作标准曲线并计算出样本的实际浓度值.
1.6 统计学方法
采用SPSS 16. 0 软件进行统计分析,计量资料做方差齐性检验,方差齐,组间均数比较釆用单因素方差分析(OnewayANOVA),两两之间比较采用LSD 检验；检验结果以（ ）表示.显著性水准取P<0.05 表示有统计学差异.
2 结果
2.1 肺组织病理学改变
结果见图1、表1.B 组光镜下可见肺间质及肺泡内出血,炎症细胞浸润,肺泡间隔增宽,并随着时间的增加而加重.C、D 两组,光镜下肺泡内少量出血,炎症细胞少量浸润,肺泡壁稍增宽.Smith 评分结果显示,其他三组Smith 评分在三个时间段均高于A 组；两组用药组在第1d 时与B 组无明显差异,在3d、7d 时两个时段明显低于B 组；C 组与D 组同时段比较,1d 时无明显差异,3d、7d 时D 组评分明显高于C 组（P<0.05）.
2.2 支气管肺泡灌洗液中TNF-α 的含量变化
结果见表2.B、C、D 三组TNF-α 水平与A 组在三个时段均比较高（P<0.05）；C、D 两组TNF-α 水平三个时段均比B 组低（P<0.05）；C 组TNF-α 水平三个时段均比D 组低.C、D 两组组内同时段比较均随着时间的延长而明显下降.
2.3 支气管肺泡灌洗液中IL-6 的含量变化结果见表3.B、C、D 三组IL-6 含量与A组相比在三个时段均比较高（P<0.05）；C、D 两组IL-6 含量三个时段均比B 组低（P<0.05）；C 组IL-6 含量三个时段均比D 组低（P<0.05）； C、D 两组组内同时段比较均随着时间的延长而下降.
3 讨论
临床报道显示[6],气管切开患者肺部感染发生率较高,气切后气道开放,病原菌侵入机体,侵入机体的病原菌可释放毒素,引起巨噬细胞等释放促炎及抑炎因子,如IL-6、TNF-α 等,在严重时促炎因子引起机体组织细胞组织自我损伤,甚至出现全身炎症反应.本实验结果气切大鼠TNF-α 及IL-6 明显升高,与上述临床报道相符[6].
本实验通过为时1 周的动态观察肺组织病理改变及支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6 含量变化,结果显示ICA 组和EPS组大鼠肺部炎症均有明显改善.有研究表明ICA 可能作用于脂多糖炎症模型鼠PI3K/Akt 信号通路,抑制NF-kB 活化,减轻外周血中TNF-α、IL-6 含量等,减轻急性肺部炎症[7].本实验发现ICA 和EPS两者均可作用于气管切开并发肺部感染模型鼠,降低支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6 含量,并随着用药时间的延长作用更明显.提示ICA 和EPS 均可减轻气管切开后并发的肺部感染,ICA 效果较佳.
中医学认为,肺主宣发,卫气达而外邪不入,气切后则“金破不鸣”,即利器损伤后肺气损伤难以发音.肺主行气,肾主纳气,肺肾阴虚则肺燥而郁热,阴液不能上承,失于濡润.《景岳全书? 杂证谟》卷二十八记载：“声由气而发,肺病则气夺,此气为声音之户也.肾藏精,精化气,阴虚则无气,此肾为声音之根也.”因此治宜补益肺肾.淫羊藿乃补肾之要药,肾气得以充盈,助肺气宣发,因而可以减轻气切大鼠肺部炎症.
（通讯作者：潘宇政）
参考文献
[1] 李炼, 代建中. 淫羊藿善治久咳虚喘[J]. 中医杂志,2000(01):12.
[2] 金华良, 王利民, 罗清莉, 厉蓓, 杜懿杰, 吕玉宝, 董竞成. 淫羊藿对哮喘大鼠气道高反应性的影响[J]. 中国实验方剂学杂志,2014(23):169-173.
[3] 朱翠香, 彭玲玲, 潘宇政等. 一次性硬膜外麻醉导管气管切开插管留置大鼠模型建立[J]. 中华实验外科杂志,2015,10(32):2480.
[4] 徐叔云主编. 药理实验方法学[M]. 北京: 人民卫生出版社,2002:1647-1664[5]Smith K M,Mrozek J D,Simonton SC,et al.Prolonged partial liquidventilation using conventionaland high-frequency ventilatorytechniques:gas exchange and lungpathology in an animal model ofrespiratory distress syndrome[J].Crit Care Med,1997,25(11):1888-1897.
[6] 贵艳玲, 蔡萍, 程明琨, 等.ICU 气管切开患者肺部感染病原菌对血清细胞因子影响的研究[J]. 中华医院感染学杂志,2016(11):2494-2496.
[ 7 ] X u C Q , L i u B J , W u J F , e tal.Icariin attenuates LPS-inducedacute inflammatory responses:involvement of PI3K/Akt and NFkappaBsignaling pathway[J].Eur JPharmacol,2010,642(1-3):146-153.
作者简介
邓淑蓉（1989-）,女,硕士研究生,广西医科大学第一临床医学院.潘宇政(1961-),男,硕士研究生导师,广西医科大学第一附属医院.
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