原创《黄曲霉毒素B1荧光定量检测试纸条性能评估测试》
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□ 上海飞测生物科技有限公司 供稿
黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1, 简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）,其剧毒且具有强致癌性,是迄今已发现的真菌毒素中最稳定的一种.从1993 年开始,黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为一类致癌物,是世界公认的三大强致癌物质之一.此外,黄曲霉毒素B1 由于毒性最大,污染最重,是黄曲霉毒素中危害最大的一种.
受黄曲霉毒素B1 污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品,且以南方高温、高湿地区受污染最为严重.目前,GB2761-2011《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》中对粮食谷物及其制品中黄曲霉毒素B1 的最高限量为20μg/kg.GB 13078-2001《饲料卫生标准》中对不同种类的饲料中黄曲霉毒素B1 的最高限量标准为10~50μg/kg.
目前, 国标法测定黄曲霉毒素B1 采用HPLC 法,但是HPLC 法需要使用大型的仪器设备,昂贵,操作过程复杂,时间较长,且无法在现场和基础小型实验室使用.除此之外,也有采取黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒或胶体金快速检测试纸条用于大量样品筛查的方法,此类方法操作简便,检测快速,成本也较低,但准确性和重复性较差,容易造成假阳性或假阴性.因此,市场上急需一种既简便快速,又能准确定量的检测方法,而荧光定量免疫层析正好可以满足这种需求.本文通过对多种粮食谷物饲料样品的实测,验证了上海飞测生物科技有限公司（以下简称“上海飞测”）开发的黄曲霉毒素B1 荧光定量快速检测试纸条的技术性能.
实验材料和方法
所需材料和设备
试剂除注明外,均为分析纯；试验用水均为UP 水.
黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条（由被有荧光微球标记黄曲霉毒素B1 抗体的乳胶垫、喷涂有黄曲霉毒素B1 抗原的检测线和喷涂有羊抗鸡二抗的控制线的NC 膜、样品垫及吸收垫组成）、样品提取液、样品稀释液、标准曲线ID卡及标准曲线条形码,以上材料由上海飞测提供.
黄曲霉毒素B1 及其他真菌毒素的标准品,购自Sigma 公司.
大米、玉米、小麦、面粉等样品,从超市购得或从企业取样.
麸皮,小麦、面粉等饲料样品,从饲料厂和企业取样.
FD-100 型荧光免疫定量分析仪和FD-5000 型试纸条恒温孵育器,上海飞测；低速离心机,上海卢湘仪离心机仪器有限公司；漩涡振荡器,海门市其林贝尔仪器制造有限公司；电子天平：Sartorius.
试验方法
样品前处理：取具有代表性的待测样品500g,用小型粉碎机粉碎1min 后过20 目筛,收集过筛的细小样品.称取1.0&plun;0.02g 过筛的样品于10mL 离心管中,加入5mL 提取液,用漩涡混匀仪震荡5min( 或者摇床振荡10min）后,4000RPM 离心1min,取上清.
检测过程： 取50μL 离心上清液加入500μL 样品稀释液中, 用漩涡混匀器混匀3~5s,然后取100μL 加入到黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条的加样孔中,置于37℃恒温孵育器中温育10min 后,将试纸条插入荧光免疫定量分析仪中读数,即为样品的实际检测浓度.当检测值大于50μg/kg 时,可用提取液将离心上清液稀释5 倍后再进行检测,所得读数值乘以对应的稀释倍数即为最终的检验结果.
检测结果分析
线性范围与检出限在样品提取液中,分别添加1.00μg/kg、2 . 5 0μg/ k g、5. 0 0μg/ k g、10 . 0 0μg/ k g、25.00μg/kg、50.00μg/kg 的黄曲霉毒素B1 标准品,用上海飞测生物黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条每个样品检测3 次,以添加浓度为纵坐标,以荧光定量检测试纸条的检测结果为横坐标,拟合曲线并计算线性相关系数.计算得出小麦的线性范围：1.00~50.00μg/kg（6 点）,回归方程：y等于1.042x+0.540, 相关系数R2等于0.998（见图1）.
取10 个无污染（阴性）小麦样品、10 个无污染（阴性）玉米样品和10 个无污染（阴性）大米样品,用上海飞测生物黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条对每个样品检测3 次,检测限（LOD）为测定平均值加3 倍标准偏差,定量限(LOQ) 为测定平均值加10 倍标准偏差.测试结果表明,黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条的LOD 为0.29μg/kg,LOQ 为0.91μg/kg.
准确性和重复性分析
在用国标法测定为0 的不同种类空白样品中分别添加黄曲霉毒素B1 浓度为1.00,2.50,5.00,10.00,25.00,50.00μg/kg 的标准品,然后按照黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条的检测方法进行检测.检测结果见表1.
从表1 可以看出,上海飞测所生产的黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条测试不同粮食谷物中黄曲霉毒素B1 的添加回收率在92.89%~121.07%,3 次重复的变异系数在14.56% 以内.
与色谱方法的对比试验结果
取大米、小麦、玉米、高粱、花生、麸皮、喷浆玉米、DDGS、豆粕受污染样品各1 份,先采用国标液相色谱法进行测定,再使用上海飞测所生产的黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条进行测定,各测试3 个平行样.检测结果见表2.
表2 表明, 在不同的粮食谷物饲料中, 上海飞测所生产的黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条与液相色谱法的符合率为89.89%~112.65%,3 次重复测定的的CV 值在10.29% 以内.
方法特异性
选择其他5 种常见的真菌毒素的标准品在阴性玉米中进行添加,添加的浓度为100μg/kg,然后用上海飞测的黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条进行测试,每个样品测3 次取平均值；结果显示与赭曲霉毒素A,伏马菌素B1,呕吐毒素、T-2 毒素、玉米赤霉烯酮交叉反应率均小于5%.实验结果表明,黄曲霉毒素B1 胶体金试剂条对伏马毒素、赭曲霉毒素、黄曲霉毒素、玉米赤霉毒素几乎无交叉反应,其方法特异性可以满足检测要求.检测结果见表3.
结论
本实验采用上海飞测所生产的黄曲霉毒素B1 荧光定量检测试纸条对不同的粮食谷物饲料样本进行测试,该产品的最低检出限（LOD）为0.29μg/kg,最低定量限(LOQ) 为0.91μg/kg,线性范围为1.00~50.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%,3 次重复的变异系数在14.56% 以内.与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%.其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对黄曲霉毒素B1 的分析标准的技术要求.该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,可用于不同粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1 的快速定量检测分析.
检测论文参考资料：
概括总结:这是一篇适合黄曲霉毒素和检测试纸和性能评估测试论文写作的大学硕士及关于检测本科毕业论文，相关检测开题报告范文和学术职称论文参考文献。
