原创《不同化学防腐剂与植物提取物对组培中常见真菌抑制效果》
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1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1菌种：黑曲霉和青霉保存于石河子大学农业生物技术重点实验室.
1.1.2 防腐剂：肉桂酸钾、尼泊金复合酯、山梨酸钾、丙酸钠,均为食品级；大蒜、新疆阿魏、孜然提取物,薰衣草精油.其他无机及有机试剂均为分析纯.
1.2 试验方法
1.2.1菌液制备.将青霉和黑曲霉活化后,用察氏液体培养基28℃振荡培养3d,并用4层纱布过滤,将滤液用无菌水稀释至孢子浓度为106个/mL后备用.
1.2.2抑菌剂的制备.分别称量食品防腐剂1g,溶解于蒸馏水中,定容到100mL后4℃保存备用.
分别取孜然种子和薰衣草干花（60℃烘干至恒重）、阿魏和大蒜（洗净,切丝,60℃烘干）,粉碎机粉碎后,称取样品20g与250mL具塞锥形瓶中,用丙酮室温抽提48h,抽提3 次,合并提取液后冷冻干燥,用丙酮溶解定容至10mL,4℃保存备用.
1.2.3抑菌试验.单一防腐剂：在MS 培养基中分别加入不同浓度、不同种类的防腐剂,配制成含有不同浓度抑菌剂的固体培养基,以不添加防腐剂的MS固体培养基为对照,每个水平6次重复.
2 结果与分析
2.1 单一化学合成防腐剂的抑菌试验
2.1.1尼泊金复合酯的抑菌效果.尼泊金复合酯对青霉和黑曲霉具有很好的抑菌作用,抑菌梯度明显.尼泊金复合酯抑菌效果随着防腐剂质量浓度的增大而加强,具体表现为菌斑生长缓慢,抑菌时间长.
2.1.2 肉桂酸钾的抑菌效果.肉桂酸钾在质量浓度为0.010％时对青霉、黑曲霉2 种菌已表现出抑制作用,其中肉桂酸钾对黑曲霉的最优抑菌质量浓度为0.035％,对青霉的最优抑菌质量浓度为0.040％.
2.1.3.山梨酸钾的抑菌效果.山梨酸钾对青霉、黑曲霉2种菌具有一定的抑制作用,但第15 天时含0.06％山梨酸钾的培养基出现污染,菌斑生长速度较快,污染率高.
2.2 单一植物源抑菌剂的抑菌试验
2.2.1大蒜提取物的抑菌效果.大蒜提取物对青霉和黑曲霉的抑制效果在质量浓度为0.4％处较明显,随着抑菌浓度的递增和时间的延长,大蒜提取物的抑菌梯度明显.大蒜提取物对青霉和黑曲霉抑制最小浓度分别为0.8％、0.09％,抑菌时间相对于化学防腐剂短,一般为15d左右.
2.2.2新疆阿魏提取物的抑菌效果.阿魏提取物对青霉和黑曲霉的抑制效果在0.6％时已较为明显,抑菌效果随着抑菌浓度的递增和观察时间的延长而越发显著.15d时阿魏提取物对青霉和黑曲霉的抑菌最优浓度分别为1.2％、1.4％.
2.2.3薰衣草提取物的抑菌效果.薰衣草提取物对青霉、黑曲霉2种菌在质量浓度为0.100％时表现出明显的抑菌效果.
3 讨论
利用防腐剂作为降低植物组培过程中霉菌污染的抑菌剂,不仅抑菌效果显著、抑菌谱广,同时也可在一定程度上简化组织培养过程中操作步骤、降低试验成本,复合防腐剂更是具有提高使用安全性、增加抑菌强度、拓宽抑菌谱等效果.因此,防腐剂对于降低污染率具有较高的可行性和重要的应用价值.在组织培养过程中,可以采用不同防腐剂复配以及交替使用不同防腐剂,以达到较好的抑菌效果,同时还应避免高浓度防腐剂对组培苗分化及生长的影响.不同植物对不同防腐剂的耐受性还有待进一步研究.
效果研究论文参考资料：
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