原创《保健食品中合成色素的反相高效液相色谱检测法》
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班素侠
（沛县检验检测中心,江苏 徐州 221600）
摘 要：目的：使用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对保健食品进行检验,分析各种剂型经常使用的合成着色剂的程序方法等.方法：选择适量的样品,采用聚酰胺吸附法提取样品,进而选择流动相与梯度洗脱程序,流动相为 0.05 mol/L 磷酸二氢铵溶液与甲醇,最后采用 AD 配备有二极管的高分离度液相色谱仪进行检测,以254nm 为检测波长.结果：柠檬黄、靛蓝、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红 6 种着色剂分离度呈理想状态,并且加标回收率较高.结论：本次方法适合保健食品不同着色剂各种剂型的分离检测.
关键词：保健食品；合成色素；反相高效液相色谱法
中图分类号：TS218
健食品亦称功能性食品,以补充人体营养素为目的.保健食品是一个特定的食品种类,可调节人体功能, 适于特定人群食用, 剂型有胶囊壳、 胶囊、 片剂,它的食用色素着色好且实惠,为了使保健食品呈现更为舒服的视觉效果以及更具吸引力,保健食品经常会采用着色剂.
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：检测仪、漏斗、天平和色谱柱.检测仪使用LC-20,AD 配备有二极管的高分离度液相色谱仪,G3垂融漏斗规格为 XS 205,G3 砂芯滤板漏斗 LC-20AD,C 18 色谱柱规格为 4.6 mm×250 mm,5 μm 以及电子天平和 0.45 μm 水相过滤膜.
试剂：UP 水（Ultrapure water）,源美制造；磷酸二氢铵、甲酸、氨水,均为分析纯；甲醇、乙醇,均为色谱纯[1] .
1.2 标准品
亮蓝纯度大于 99.7%,柠檬黄纯度大于 91.0%,日落黄纯度规格 GBW(E)10003 a,0.5 mg/mL；赤藓红纯度大于 91.7%,诱惑红纯度大于 80.0%.
1.2.1 标准液的制备
按照标准规格制备标准液,浓度为 1.0 mg/mL,首先取适量需要配制的标准品加入 25 mL 容量瓶中,并使用水定容,逐渐将溶液调制为标准浓度.另外需要注意的是,日落黄其标准的储备溶液与正常溶液浓度不同,浓度为 0.5 mg/mL [2] .
1.2.2 混合液的制作配备
混合液需要多种标准液混合在一起,可将既定需要混合的标准液进行混合,混合时首先需要用水将其稀释,进而制备成不同含量的混合液,分别为 2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL,配好后保存待用.
1.3 色谱条件
色素条件主要观察色谱柱,其规格4.6 mm×250 mm,5 μm,检测波长 254 nm,柱温为 30 ℃,进样量为10 μL.流速 l mL/min.具体梯度条件见表 1.
1.4 样品处理
称取一定量的片剂研磨,直到研钵中的片剂磨成均匀细碎的粉状后称样. 除片剂外还有胶囊和胶囊壳,胶囊壳的制作是将胶囊内的粉粒状物全部取出,用棉签擦拭胶囊壳直至其完全干净无粉粒残留进行称样[3] .将这些试样取出一定量倒进 100 mL 小烧杯中,然后注入 30 mL 的水并将水温加至温热至样品溶解,以 60 ℃为准,取 1 g 聚酰胺粉与水慢慢调制成粥状,进而倒入方才溶解试样的溶液中进行搅拌. 进一步将其洗涤,首先用 G3 垂熔漏斗过滤过的 60 ℃水洗涤 3 次,进而将甲醇 60% 与甲酸 40% 混合好的溶液再洗涤 3 次,将其洗涤成中性溶液,接着用混合乙醇 70% 以及氨水20% 以及水 10% 的混合液对溶液进行解吸,一共分 4次进行,每次需要 5 mL,在解吸后用乙酸进行溶液中和,进而蒸发定容,最后将溶液处理为 5 mL,最后用0.45 μm 滤膜对溶液进行过滤,做液相色谱检测.
1.5 稳定性试验
每间隔 2 h 对标准混合液以液相色谱检测法的色谱条件进行取样分析,及时记录这 6 种着色剂组分的标准工作曲线的线性关系及相关系数, 实验结果表明,各种分浓度与峰面积呈良好线性关系,以 3 倍噪声比确定最低检出限.线性范围、回归方程、相关系数及检出限见表 2.
2 结果与讨论
2.1 流动相种类与梯度洗脱程序的选用
着色剂中为水溶性则容易在水中溶解,这些溶液其中的理化性质都存在一定程度的相似性,尤其水溶性着色剂中的乙酸铵,其水溶性相比其他溶液更为优质,经常会被当作缓冲溶液来用,但其本身也带有腐蚀性,且腐蚀对仪器,有清洗难度.因此为得到更好的分离比,需要根据 GB/T 5009.35-2003,对流动相以及梯度洗脱程序进行选用,本次选择的流动相为0.05 mol/L 磷酸二氢铵溶液与甲醇,对其进行洗脱,这6 种合成色素在分离程度上都呈现较好分离结果,如图 1、2、3,并且基线平稳,灵敏度上也有较高的效果.
2.2 稳定性试验
每间隔 2 h 对标准混合液以液相色谱检测法的色谱条件进行取样分析,及时记录这 6 种着色剂的峰面积并计算 RSD,见表 3.
2.3 样品试验结果及重复性试验
按照第一部分的样品处理相关程序对片剂以及胶囊壳、胶囊进行处理后进行色谱分析,结果见表 4.依照 GB 2760-2014 所规定的着色剂标准,可得出测试的样品中也就是这6种合成着色剂都符合规定的标准,无一超出,见表 5.
3 结论
本文按照 RP-HPLC 的方法探讨反相高效液相色谱检测法,测试时采用合成着色剂为样例,并根据保健食品本身的特点以及样剂的剂型的不同进行针对性地检测.本次研究所采取的方法易操作且实验速度上把握良好,混合色素的分离较为顺利且结果上分离度也呈现较好状态,样品稳定性上也呈现良好结果,在回收率上也呈现较为理想的状态.因此本次方法适合保健食品不同着色剂各种剂型的分离检测.
保健食品论文参考资料：
小结,这篇文章为关于高效液相色谱和保健食品和反相方面的相关大学硕士和保健食品本科毕业论文以及相关保健食品论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料。
