原创《乙型肝炎病毒DNA定量检测的临床应用与其局限》
本文是关于乙型肝炎相关本科毕业论文范文和乙型肝炎病毒和临床应用和定量相关本科论文范文。
文/ 张元元 李正金 杨锡彤 毕磊 王光明(通讯作者)
【摘 要】目的：通过分析HBV 患者2156 例的DNA 定量检测数据,以了解HBV 定量检测在临床中的应用及其局限性.方法：应用荧光定量PCR 技术对2156 例HBV 患者进行HBV-DNA 定量检测,并分析检测结果.结果：在2156例乙肝患者中,HBV 阳性率为48.98%；在2156 例患者中,HBV-DNA 检测两次以上的有253 例,其中多次检查均为阴性的有50 例；在其余的203 例患者中,抗病毒治疗有效的占40.89%,两次检查期间发生感染的占16.26%,治疗无效的占42.86%.结论：HBV-DNA 定量检查可以为HBV 感染患者的临床疗效提供参考依据,但是对于多次检测HBV 载量没有降低的人群应该辅以HBV 耐药性检测.
【关键词】乙型肝炎,乙型肝炎病毒,DNA 定量检测
【中图分类号】R321.5
肝病是世界范围内引起疾病和死亡的主要原因.在中国,大约有3 亿人受到包括病毒性肝炎、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、肝硬化及肝癌等肝病的影响[1].慢性肝炎、肝硬化及肝癌是乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）持续感染的不良结局[2-4].引起死亡的主要癌症之一的肝癌,在中国已经处于癌症发病的第二位,每年大约有383,000 人死于肝癌,占全球肝癌死亡人数的51%[1].
Lin[2]等人进行乙肝病毒载量升高与肝脏疾病/肝癌之间关系的风险评估（The first Risk Evaluation of Viral Load Elevation and Associated Liver Disease/Cancer-Hepatitis B Virus,REVEAL-HBV) 的队列研究显示当血清中HBV-DNA 载量大于2000IU/ml 时,HBV 是肝硬化和肝癌的高危险因素,因此HBV 检测对于乙型肝炎的诊断和治疗具有十分重要的临床意义[3, 5].
传统的乙型肝炎诊断主要采用HBV 标志物：乙肝五项（乙肝表面抗原,HBsAg；乙肝表面抗体,HBsAb；乙型肝炎e抗原,HBeAg；乙型肝炎e 抗体,HBeAb；乙肝表面核心抗体,HBcAb)进行检测[5],然而乙肝五项只能够对患者有无病毒感染以及是否产生抗体进行一定的判读,却不能够判断患者是否为HBV 携带者（即HBV 隐性感染）以及对乙肝患者进行确诊.因此对于寻找更加有效和准确的乙型肝炎检测技术对乙型肝炎患者的预防和治疗有重要的意义.本研究通过回顾分析云南省大理地区在2012 年4 月至2015 年8 月间到大理大学附属医院就诊的2156 例乙型肝炎患者的HBV 感染病毒载量情况,从而进一步了解HBV-DNA 病毒载量检测在乙型肝炎预防和诊治中的价值.
1 材料和方法
1.1 研究对象
2012 年4 月至2015 年8 月间到大理大学附属医院就诊的乙肝患者标本共2156 例,年龄12 至85 岁,患者均知情同意.
1.2 标本采集与处理
首先采集患者的静脉血1ml,2000rpm 离心20min,收集0.2ml血清4℃保存备用.
1.3 试剂仪器
荧光定量PCR 仪（荧光定量基因扩增PCR 检测系统TL988 型）来自西安天隆科技有限公司（西安,中国）,荧光定量PCR检测试剂盒购自艾康生物技术有限公司（杭州,中国）.
1.4 检测流程
严格按照艾康生物技术有限公司" 乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒（PCR 荧光法）" 的说明书进行操作,简单描述如下：以40ul 体系进行检测,其中包括含HBV 模板的4ul 血清；每次扩增分别设置2 个阳性对照（强阳性对照、临界阳性对照）、阴性对照和4 个标准品（104IU/ml、105IU/ml、106IU/ml、107IU/ml）,扩增条件为95℃预变性4min,94℃15sec,60℃ 30sec,40 个循环.
该试剂盒的检测范围为500-1×108IU/ml,对样本进行检测时检测结果的值在该范围内,结果有效；如果样本的检测结果超过1×108IU/ml,需对标本进行稀释,然后重新检测.
1.5 统计学处理
用SPSS10.0 统计学软件进行统计学处理,不同性别和年龄段间以及不同性别间的发生率的差异用χ2 检验,P＜0.05 认为差异有统计学意义.
2 结果
2.1 一般情况
共检测2156 例患者,其中HBV 感染阳性患者1056 例,阳性率为49.98%.男性标本1328 例,年龄12-85 岁,阳性病例657,阳性率49.47%；女性病例828 例,年龄12-82 岁,阳性病例399,阳性率48.19%,经χ2 检验分析,男女之间在年龄、发病率等都没有统计学意义（P＞0.05）.
2.2 各个年龄段感染情况
在2156 例患者中,除10 例患者年龄不清楚外,在不考虑性别因素的情况下,以20 岁以下的感染率最高（60.61%）,其次为20至30 岁间的感染（57.70%）,30 岁以下检查病例数为501 例（23.35%）,HBV 阳性数为291,占总阳性病例数的比例为27.66%；最低阳性率为60 岁以上年龄段（40.14%）,各个年龄段阳性率比较差异有统计学意义（P等于0.030）.
在考虑性别因素的情况下,在1323 例男性患者和823例女性患者中,其各个年龄段的感染情况见表1.最高感染率的年龄段仍然为20 岁以下,感染率均为60.61%,其次为20 至30 岁间的感染,感染率分别为60.45%和54.88%,合并两个年龄段,即30 岁以下检查病例数分别为253 和248 例,占男、女患者的比例为19.12%和29.77%,HBV 阳性数分别为153 和138,占总阳性病例数的比例分别为23.32%和34.84%,男女年龄段间的感染率进行统计分析,有统计学意义（P值分别为0.041 和0.0295）.
2.3 HBV 定量检测两次以上患者情况
在进行HBV 定量检测的2156 患者中,有253 例患者进行了两次或者两次以上的HBV 定量检测,占总检查人数的11.73%；在253 例患者中,两次或者两次以上检测均为阴性的有50 例,至少有一次HBV 检测为阳性的患者203 例；在这203 例患者中,第一次检查HBV 为阳性,第二次及其以后检查HBV 为阴性的患者83 例,占40.89%；第一次检查HBV为阴性,第二次及其以后检查HBV 为阳性的患者33 例,占16.26%；在多次检查中,病毒载量不变、继续升高或者反复的患者87 例,占42.86%.
3 讨论
由于HBV 持续感染与慢性肝炎、肝硬化及肝癌密切相关[6, 7],因此HBV 的感染已经成为严重的公共卫生问题,大约世界人口的三分之一受到了HBV 感染,并且约有3.5 亿的人口（约5-6%）为持续携带者,在HBV 持续感染患者中,约10-30%的患者将发展为肝硬化和肝癌[7],由于传统的乙型肝炎诊断主要采用乙肝五项进行,但是该技术却不能够判断患者是否为HBV 携带者以及对乙肝患者进行确诊.因此对乙型肝炎患者进行HBV-DNA 定量检测将对乙型肝炎感染的预防和治疗有重要的意义.
本研究中,我们对云南省大理地区的2156 例乙肝患者进行了HBV-DNA定量检测,其HBV检测阳性达到了49.98%,但是由于检测人群为临床上乙肝五项检测确诊的乙肝患者,因此该阳性率不能够代表该地区的乙型肝炎病毒感染的实际感染率,另外,从结果也可以说明乙肝五项阳性的患者的检测结果不能够对患者是否为HBV 携带者进行正确诊断.通过分析,该部分病人的感染率与性别无关,但是各个年龄段的感染率有统计学意义,30 岁以下检查病例数为501 例（23.35%）,HBV 阳性数为291,占总阳性病例数的比例为27.66%；阳性率最低的为60 岁以上年龄段,说明HBV 感染在各个年龄段间有差异,有可能与不同年龄段的人群的生活方式有关,30 岁以下人群的生活方式较开放,与周围其他人的接触较紧密,而60 岁以上的人群由于年龄因素、生活方式等多方面的原因,其生活相对封闭,与其他人的接触较少,因此被感染HBV 的几率明显低于30 岁以下的年轻人.
参与该研究的2156 例患者中,有253 例患者进行了多次检查,多次检查均为阴性的有50 例,占多次检查病人数19.76%.其余的203 例患者中,在第一次检查为阳性后临床上给予抗病毒治疗[8, 9],治疗一个疗程后再次进行HBV-DNA定量检测,第二次检查HBV 病毒载量下降的部分病人进行了后续检查,这部分病人的HBV 病毒载量均为阴性,说明疗程治疗有效,但是该部分病人仅仅有83 例,占203 例患者的40.89；第一次检查为阴性,后续检查后阳性的有33 例,说明患者在检查期间发生了HBV 感染；在多次检查中,病毒载量不变、继续升高或者反复的患者87 例,占42.86%,说明该部分病人抗病毒治疗无效.究其原因,可能是由于患者自身的遗传易感性或者是HBV 病毒DNA 嵌合到患者基因组中[6,8, 10],容易引发耐药性,因此对于这部分病人,需要进行乙肝病毒耐药性检测,从而为临床抗病物的使用提供依据.
综上所述,云南省大理地区HBV 的感染率与性别无关,但是与年龄有关,30 岁以下人群感染率较高；另外,第一次检查的人群没有发生感染,如果不注意生活方式及其卫生习惯,仍然存在感染的风险；抗病毒感染治疗无效的人群比例较大,因此应该加强对30 岁以下的年轻群体HBV 感染筛查的宣传,对于已经感染的人群应该建议进行耐药性检测,为HBV 感染的预防和治疗提供依据,从而为减轻由于HBV 感染带来的社会、经济负担创造条件.
【作者简介】
张元元(1974-),女,白族,云南大理人.硕士,副教授.从事临床医学教学及科研工作.
（作者单位：大理学院临床医学院）
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