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《食品金葡萄球菌定量检测质量控制》

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摘　要：按照国家标准GB 4789.10-2016 检测食品样品中的金葡萄球菌,分离和鉴定疑似菌落,抓住定量检测质量控制的关键控制点,以期为新接触金葡萄球菌定量检测的检验员提供一些有价值的参考.

关键词：金葡萄球菌；定量检测；质量控制

Abstracts：According to the national standard of GB 4789.10-2016 detection in food samples ofstaphylococcus aureus, isolation and identification of suspected colonies, seize the key control points of qualitycontrol of quantitative detection, in order to provide some valuable reference for the new contact quantitativedetection of Staphylococcus aureus inspector.

Key words：Staphylococcus aureus; Quantitative detection; Quality control

中图分类号：R446.5

金葡萄球菌,也称“金葡菌”,是人类感染疾病的主要致病菌,所以国家标准对各类食品金葡萄球菌的控制有明确说明.作为食品微生物检验人员,提高金葡萄球菌的检测能力,抓住质量控制关键点至关重要.

1　材料与设备

实验对象：雅安市29 个品种预包装食品样品.菌株：金葡萄球菌[CMCC（B）26003],购自上海鲁微科技有限公司.

培养基及材料：Baird-Parker 琼脂平板（批号：3106026）、BairdParker 琼脂成品平板（批号：G0161Y）、脑心浸出物肉汤（BHI）（批号：3106063）、血平板、冻干血浆均购自广东环凯微生物科技有限公司.

仪器设备：VITEK 2 COMPACT（全自动微生物分析系统）仪,梅里埃诊断产品（上海）有限公司；BSC-1500IIA2-X 型生物安全柜,济南鑫贝西生物技术有限公司；SPX-150 型生化培养箱,上海迅博实业有限公司医疗设备厂；BKQP 系列压力蒸汽灭菌器,临龙江压力容器制造有限公司；HBM-400B 型无菌均质器,天津市恒奥科技发展有限公司；BK-FL 荧光显微镜,重庆奥特光学仪器有限责任公司.

2　操作方法

2.1　样品的稀释及培养

严格按照GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金葡萄球菌定量检验》平板计数法操作.

2.2　初步鉴定

染色镜检：挑取Baird-Parker 平板上可疑单个菌落进行革兰氏染色,镜检.金葡萄球菌为革兰阳性球菌,无芽孢排列呈不规则的葡萄状,亦可呈单个、成双或短链状排列.

血浆凝固酶试验：严格按照GB 4789.10-2016 中5.5.2 操作,同时做阴性和阳性对照.

血平板：同时划线接种到血平板（36&plun;1）℃培养18 ～ 24 h 后观察菌落形态,金葡萄球菌菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金（有时为白色）,菌落周围可见完全透明溶血圈.

2.3　鉴定复核

所有可疑的革兰氏阳性菌,都选取新鲜的培养物制备菌悬液上VITEK 2 COMPACT 全自动微生物分析系统鉴定.

3　结果

29 个品种在Baird-Parker 平板上有可疑菌落4 个,革兰氏阳性球菌2 种,血浆凝固酶试验阳性0 份,同时在血平板上无菌落生长,结果显示这29 个品种的预包装食品全部符合标准要求.

4　讨论

4.1　实验过程中的质量控制

（1）临用现制的Baird-Parker 平板在制备时温度不宜超过45 ℃,以防冷凝水过多,平板制备好后可以在生物安全柜里将盖子斜靠在边上,等冷凝水挥,发也可提前制备好后置于36 ℃培养箱中预培养1 d,这样既可以除去多余的水分,又可以做到无菌培养.

（2）稀释液应灭菌后再分装,以免先分装再灭菌带来的体积误差.

（3）进行梯度稀释时,要准确吸取毫升量,稀释菌液要充分混合,第一步溶解菌球和奶粉产品时先可以采用拍击均质器混匀,后续梯度稀释可以用涡旋仪进行混匀[1].另外,如果是冷藏后的检品,样品检验时,应等待样品达到室温后再添加稀释液,因为温度迅速上升会导致细胞破裂,影响检测结果.

（4）Baird-Parker 平板涂布时,L 涂布棒应均匀涂布整个平板,注意不要触及平板边缘,避免涂到平板边缘造成菌落蔓延生长,并造成最后的计数偏低的情况.另外,经过多次试验,建议在计数时采用Baird-Parker 成品培养基,因为成品培养基更平整、光滑、干燥,更有利于稀释液的吸收.

（5）观察时间需要逐步进行,避免杂菌或菌落蔓延造成计数的偏差.因为如果样品中存在变形杆菌污染,到48 h 观察结果时,金葡萄球菌的菌落被变形杆菌的扩散生长而覆盖,所以,培养到24 h 时先观察一次并计数,36 h 观察,直至48 h 再观察计数.

（6）在鉴定复核时,选取新鲜的培养物制备适宜浓度的菌悬液后再上VITEK 2 COMPACT（全自动微生物分析系统）仪器进行鉴定试验.

4.2　标准菌株的质量控制

标准菌株在评价检验结果的可靠性及检验过程的质量控制中发挥着不可替代的作用[2].金葡萄球菌的血浆凝固酶试验原理为病原性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白,附于细菌表面,生成凝块[3].所以,在做样的同时带着以阳性（金葡萄球菌）和阴性（表皮葡萄球菌）菌株的肉汤培养物对照试验更能清楚地判定阴阳性.

4.3　培养基及试剂的质量控制

培养基是微生物试验的基础,直接影响微生物试验结果,使用前必须进行培养基适应性试验,待其选择性、生长性和特异性等质控指标达标后方可用于检验.另外,关键试剂也是影响检验结果的一个重要因素.关键试剂包括革兰氏染色液、冻干血浆和凝固酶血浆试剂等.凝固酶血浆试剂应每次与表皮葡萄球菌和金葡萄球菌做阴阳对照[4],此外还应注意所用试剂和成品培养基在贮存时的避光、冷藏等要求,保证试剂和培养基的稳定性.

4.4　人为因素的质量控制

检测人员作为食品微生物检验工作的主体,在食品微生物检验质量控制工作中起着重要的作用.因此,检测人员应有较强的责任感和使命感,认真把控实验中的每个环节,熟悉国家相关标准规定并严格遵照执行,更好地控制食品微生物的检验质量.

4.5　硬件设施的质量控制

食品微生物检测中,实验仪器是必备的硬件设备.因此,应严格按照本单位制定的仪器操作规程及维护规程,在每次使用完详细填写记录,保证检测结果的真实性、准确性和可溯源性.

5　结语

本文旨在总结金葡萄球菌定量检测时的质量控制关键点,并提出建议,从而提高检验人员的检测能力,提升实验室检测水平.

参考文献：

[1] 陈学强,周　浩,刘　华,等. 金葡萄球菌定量检测人员比对和质量控制[J]. 中国卫生检验杂志,2017,4（27）：1063-1064.

[2] 杨丰旭. 标准菌株在食品微生物检验中的重要作用[J]. 食品安全导刊,2017（2）：96.

[3] 石琳,李学兴,梁伟,等.100 份食品样品中金葡萄球菌的检测情况[J]. 食品安全导刊,2017（1）：139-140.

[4] 袁　平,马群飞,杨毓环,等. 金葡萄球菌定量检测实验室间比对结果分析[J]. 中国卫生检验杂志,2012,10（22）：2506-2507.

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