原创《近三年东海县H5高致病性禽流感免疫抗体监测与分析》
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摘 要：为了全面了解和掌握东海县近几年禽流感的免疫效果,科学评价基层免疫工作质量,作为实验室检测人员的笔者汇总了从2013～2015年3年的试验结果,共采集血样5888份,合格数量是5147,合格率是87. 41%,合格率高于农业部要求的70%的标准.
关键词：高致病性禽流感；抗体水平；监测与分析
中图分类号：S851.3
文献标识码：A
文章编号：2095-9737(2016)11-0002-02
禽流感是由A型流感病毒引起多种家禽及野鸟发病的高度接触性传染病,又名欧洲鸡瘟.高致病性禽流感是世界养禽业最重要的疫病之一[1],给养禽业带来了巨大的损失.在我国采取以疫苗免疫为主的综合性防治措施来防控该病.每年东海县不定期对已免疫家禽H5高致病性禽流感免疫抗体进行检测,掌握抗体水平,同时适时指导防疫,这样对防控高致病性禽流感的发生和流行具有十分重要的作用.现将东海县从2 013～2015年高致病性禽流感免疫抗体检测结果分析讨论如下.
1 材料与方法
1.1试验材料
试验动物来自江苏省连云港市东海县21个乡镇的部分规模鸡场和散养户.
血清样品：采集全县21个乡镇的部分规模鸡场和散养户鸡的全血,血液凝固后以3000r,min离心5min,吸出血清,4℃保存.如果近期不进行检测的话最好冷冻保存.
主要仪器：V型96孑L微量反应板,离心机,微量振荡器,微量移液器及相配的头,洗板机,灭菌离心管.
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1.2试验方法
1.2.1单位抗原校正
①首先用微量移液向反应板的第2～6孔加生理盐水25μL.第1孔不加.②用微量移液吸取4U抗原25μL分别加入第1孔、第2孔,从第2孔开始挤压6次混合,后吸出25μL至第3孔,依次倍比稀释到第5孑L,弃去25μL.③用移液再吸取1%红细胞悬液依次加入到1～6孔,每孔25μL.④于微量振荡器振荡Imin.室温静置30min后观察结果.⑤结果观察：第1、2、3孔为完全凝聚,第4孔红细胞为50%沉淀,第5孔为对照完全沉淀,如果出现以上结果,表明所配4U抗原准确,校正成立.一定要进行4U抗原的校正,否则影响后面的试验结果.
1.2.2抗体检测方法
按照国标GB/T18936 - 2003《高致病性禽流感诊断技术》和禽流感微量红细胞凝聚抑制试验( SN/T1182.2 -2004)规定,采用血凝抑制试验,集中对血清样品机械实验室检测,并作系统分析.
1.2.2.1血凝试验操作方法
①在V型微量反应板中,每孔加入25μL的PBS;②第1孔加入25μL抗原,依次作25μL的对比稀释至11孔；③每孔加入25μL PBS;④每孔加入25μL l%的红细胞；⑤将反应板在振荡器上震荡1～2min,室温静置40min；⑥结果判定：将反应板倾斜,观察红细胞有无呈泪滴状流淌,完全无泪滴样流淌的最高稀释倍数为血凝效价.
1.2.2.2血凝抑制试验操作方法
①根据血凝试验测定的效价,计算配置4U抗原.血凝效价除以4即为含4U抗原的稀释倍数.②反应板中第1～11孔加入25μL的PBS,第12孔加入20μL的PBS;③第1孔加入25μL的血清；④在反应板上将血清作25μL的稀释,至第10孔；⑤第1—11孔均加入25 μL的4U抗原,室温下静置30min.⑥每孔加入2511L1%的红细胞,轻晃均匀后,室温静置30min,当对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果.
1.2.2.3结果判定
以完全抑制4U抗原的最高血清稀释倍数为该血清的血凝抑制效价.当阳性对照血清的试验结果符合血凝抑制试验的要求,阴性血清效价不高于1:4时候,试验才成立.被检样品血凝抑制效价小于等于1：4的为阴性,大于等于1: 16的为阳性.
2试验结果
2.1 不同年份免疫抗体合格率情况
由表1可见2 013～2015年共检测5888份血清,2013年的合格率为82. 06%,2014年的合格率为87. 15%,2015年的合格率为96. 21%,近三年整体的合格率为87. 41%.
2.2免疫次数与免疫效果的相关分析
由表2可见,免疫次数越多,合格率越高.
2.3 不同饲养方式免疫抗体合格率情况
3 分析与讨论
从以上数据可以看出,近三年东海县的高致病性禽流感的抗体水平为87. 41%,远远高于农业部规定的70%的要求.我们通过这几年的试验也验证了一点,免疫1次的合格率仅为31. 52%,而免疫2次以上的合格率高达88. 74%,随着免疫次数的增加,抗体合格率明显升高,免疫效果与免疫次数成正比的关系.
规模场比散养户的抗体合格率高,据分析其原因是,规模场的技术力量强,技术人员操作熟练,保证了禽流感的抗体合格率.另外,规模场防疫意识比较强,管理实行规范化、科学化、常态化；而散养户,养殖量小,硬件设施跟不上,防疫意识差,免疫工作不到位,所以抗体水平低.
禽流感抗体监测工作是评价和指导防控工作的重要措施.在家禽养殖中,长期对A1的血清学监测是十分必要,通过血清学监测,可以准确掌握疫情动态,科学地进行综合免疫预防禽流感,尤其是高致病性禽流感.禽流感防控是一项长期持久的工作,但只要认真做好疫情的监测,及时采取有关措施,紧急免疫预防,禽流感疫情是完全可以得到有效控制和消灭的.
从最近三年的数据可以看出,禽流感抗体的合格率是逐年提高的,说明东海县在禽流感防控这方面做的很到位,尤其是在2016年更加大了力度,要求各乡镇（街道、场、区）及相关养殖企业要高度重视监测结果,针对存在问题,要追本溯源,明确责任,免疫抗体未达标的乡镇（街道）要深刻反思、认真查找原因,及时组织整改.一要开展补免.要针对规模场、小规模养殖及散养畜禽的不同特点,实行分类指导,强化程序免疫与集中免疫相结合,不留死角,确保抗体合格率达标.二要加强对自免规模养殖场的监管.大力推广使用政府采购的免费疫苗.要加强对防疫员、规模场技术人员防疫知识的普及,适时开展免疫技术培训,规范免疫操作.三要加强疫苗存储、运输等环节的冷链管理,及时保养维修,确保疫苗质量.四要适时开展免疫监测采样,根据监测结果进行疫情分析,及时补免,确保全县畜禽重大动物疫病免疫抗体处于有效保护状态.
参考文献：
[1]刘素梅,杨士清,张连英,等．禽流感区域控制重点环节抗体监测应用技术的探讨[J]．当代畜牧,2006(03)：9．
[2]国家标准化管理委员会．SN/T1182.2 - 2004禽流感微量红细胞凝聚抑制试验[S]．北京：中国标准出版社,2004．
近三年论文参考资料：
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