原创《高效液相色谱法检测玉米制品和坚果制品中的黄曲霉毒素》
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孟之航 徐州市第一中学
郁倩 徐州市疾病预防控制中心
摘 要：目的是了解市售玉米制品和坚果制品中的黄曲霉毒素污染状况.方法为结合免疫亲和样品前处理技术,采用高效液相色谱法测定市售玉米制品、坚果制品中的4 种黄曲霉毒素.检测了25 份市售玉米制品和24 份坚果制品,结果显示,其中玉米制品的阳性率为36%,坚果制品中未检出.结论得出,目前市售食品中黄曲霉毒素污染问题主要存在于玉米及其制品中,污染程度虽不高,但由于黄曲霉毒素的强烈致癌作用,还是应该引起重视.
关键词：液相色谱法 黄曲霉毒素 检测
黄曲霉毒素（Aflatoxins,简称AFT）是由曲霉属中的黄曲霉和寄生曲霉所产生的有毒代谢产物,目前已经发现的黄曲霉毒素有B1、B2、G1、G2、M1、M2 等17 种.1993 年,AFT 被世界卫生组织的癌症研究机构划定为一类致癌物[1].据估算,全世界每年约有25% 的谷物受到霉菌毒素影响[2].近20 年的监测数据表明,乳品等动物源性食品中黄曲霉毒素的污染率居高不下[3].随着人们的食品安全意识不断提高,黄曲霉毒素的检测已经引起社会的广泛关注和政府的高度重视,检测方法将向简便、快捷、灵敏度高的方向发展.黄曲霉毒素广泛存在于霉变的玉米制品、花生制品、大米、坚果制品及乳制品等食品中,对人和动物均具有很强的致癌作用和毒性,是诱发肝癌的重要物质之一.为了解易受到黄曲霉毒素污染的食品中黄曲霉毒素的污染状况,探讨其对人体存在的潜在风险,本研究结合免疫亲和样品前处理技术及高效液相色谱法测定市售玉米制品、坚果制品中的黄曲霉毒素.
1 材料与方法
1.1 仪器设备
Agilent 1100 液相色谱仪, 荧光检测器（G1321BFLD）；电动振荡器：IKA 调速多用振荡器（KS 501）；漩涡振荡器：IKA MS 3；固相萃取仪：SUPELCO.
1.2 材料和试剂
甲醇、三氟乙酸、正己烷、乙腈均为色谱纯；黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 混合标准品(1μg/mL,Sigma 公司)；黄曲霉毒素免疫亲和柱（美国Beacon）.
1.3 色谱条件
色谱柱：4.6×250mm,5μm,C18；柱温：30℃.流动相：乙腈- 水,梯度洗脱,梯度条件见表1；流速：1.0mL/min.
荧光检测器：激发波长：360nm；发射波长：440nm；进样量：25μL.
1.4 样品处理
1.4.1 样品提取及净化
将样品打磨碎后准确称取25.0g 于250mL 具塞锥形瓶中,加5.0g 氯化钠及甲醇- 水（7+3）至125.0mL,用均质器高速搅拌提取2min.过滤后准确移取15.0mL 滤液,并加入30.0mL 水稀释,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,备用.移取15.0mL 样品提取液,按照免疫亲和柱使用说明书,通过亲和柱的净化和浓缩.最后准确加入1.0mL 色谱级甲醇洗脱,收集洗脱液于试管中,供检测使用.
1.4.2 样品衍生
将试管中收集的洗脱液用氮气吹干（在60℃下）,加入200μL 正己烷和100μL 三氟乙酸, 密闭混匀30s 后,在40&plun;1℃烘箱中衍生15min.氮气吹干,准确加入200μL85% 乙腈,溶解,振荡器上混匀,1000r/min 离心15min,取上清液至自动进样瓶中,供测定用.
1.5 工作曲线的制备
吸取适量的标准使用液,使其成一系列,60℃下氮气吹干,注意氮吹要温和,衍生化方法同1.4.2.
1.6 样品的测定
黄曲霉毒素出峰顺序为：AFTG1、AFTB1、AFTG2、AFTB2,以每种黄曲霉毒素标准系列的浓度对峰面积绘制标准曲线.试样根据保留时间定性,根据峰面积定量.
2 结果
2.1 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 标准谱图
应用上述条件,分析了4 种黄曲霉毒素混合标准品,黄曲霉毒素按照G1、B1、G2、B2 的顺序出峰,所得色谱图如图1 所示.
2.2 方法的检出限
在本实验条件下,取不同浓度的黄曲霉毒素混合标准溶液进行测定,以3 倍信噪比计算目标物组分的检出限量,B1、B2、G1、G2 检出限分别为：0.2、0.05、0.2、0.05μg/kg.
2.3 方法的准确度和精密度
在一份空白花生样品中,分别加入0.05、0.10、0.25μg3 种浓度的B1、B2、G1、G2, 各平行测定6 次, 进行准确度和精密度测定的实验,结果见表2.其加标回收率在82.00％ ~94.47％之间,RSD 在1.50％ ~6.45％之间.
2.4 坚果制品中黄曲霉毒素检测结果
本项研究共采集并检测了24 份坚果制品,分别为开心果、杏仁、松仁等坚果类食品,所检样品均未检出黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2.
2.5 玉米粉（碴）中黄曲霉毒素检测结果
本项研究共采集并检测了25 份市售玉米制品,分别为干玉米粒、玉米粉、玉米片,均无霉变现象,共检出9 份样品含有黄曲霉毒素,阳性率36%,其中一份样品超出国家允许限量标准.
3 讨论
结果显示,玉米制品的黄曲霉毒素污染情况较为普遍,36.0% 的玉米制品受到黄曲霉毒素污染,4 种毒素中以AFTB1 阳性率和浓度最高,AFTB2、AFTG1 和AFTG2 依次降低,每种毒素的阳性率比前一种降低20% 左右,变化比较平稳.4 种黄曲霉毒素中,AFTB1 的阳性率和浓度都最高,是AFTS 的主要组成成分.总体而言,AFTB2、AFTG1 和AFTG2 的污染水平依次降低.
本研究显示,目前市售食品中黄曲霉毒素污染问题主要存在于玉米及其制品中,污染程度虽不高,但由于黄曲霉毒素的强烈致癌作用,还是应该引起重视.粮食收获后,要加强保管,严格控制霉菌生长条件,严格防霉.改善贮藏条件,抑制霉菌生长.为保障食品安全,政府部门在做好田间管理的同时,还应加强日常的监督检查,使抽检监测工作稳定化、常规化、连续化,指导百姓安全食用,让人们食得放心,食得健康.
参考文献：
[1] 劳文艳,林素珍. 黄曲霉毒素对食品的污染及危害[J]. 北京联合大学学报,2011,25(1):64-69．
[2] 胡娜,许杨. 组合实验设计用于黄曲霉毒素污染控制的研究[J]. 粮食储藏,2006(3):39-42.
[3] 段文仲,吕红英,庞津霞. 动物源性食品中黄曲霉毒素污染控制研究[J]. 现代农业科技,2009(7):206-208.
检测论文参考资料：
总结：上述文章是一篇适合黄曲霉毒素和坚果制品和色谱法论文写作的大学硕士及关于检测本科毕业论文，相关检测开题报告范文和学术职称论文参考文献。
